- 締切済み
大腸菌のクローニング方法
noname#211914の回答
以下の参考ＵＲＬサイトで「大腸菌」に関する記載がありますが、もう少しどのような分野での研究を調べられるのか補足お願いします。
関連するQ&A
- PCRと大腸菌クローニングの違いについて教えてください
大腸菌によるクローニングを用いた解析の流れとして，PCR-Cloning-Sequencing法があるかと思います． シークエンスにかける前に，わざわざ大腸菌でクローニングする理由が分かりません．シークエンスにかけるため，対象DNAを増やすのであれば，そのままPCRで増やしてはダメなのでしょうか？ クローニングには対象DNAを増やす以外の何か重要な意味があるのでしょうか？（PCRにカイネティクスがある事は存じております)．専門書で確認したところ，ターゲットDNAを増幅させるという意味において，広義にはPCRもクローニングの一部だと書いてありました． すいません．素人質問で申し訳ありません． よろしくお願い致します．
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌の形質転換を利用したクローニング
先日実験で、大腸菌の形質転換を利用したクローニングを行いました。 集菌と科学的処理 (1)大腸菌の培養液を氷上で冷却した。 (2)培養液5 mLを遠沈管に移し、3000 rpmで5分間遠心した。 (3)大腸菌のペレットを崩さないように上側にして、培養液の上澄みをデカントして捨てた。 (4)あらかじめ冷やしておいた形質転換用溶液（TSS）500 nLにDMSOを25 nL入れて、混ぜた。 (5)(4)を500 nL加えた。 (6)ボルテックスで穏やかに撹拌して、ペレットを縣濁した。 (7)懸濁液を100 nLずつエッペン管に分注して、形質転換に用いた。 (8)ライゲーション反応のDNA溶液を5 nL加えて、指先で軽く撹拌した。 (9)氷上に14:05～14:25頃まで放置して、DNAを取り込ませた。 寒天培地への植え継ぎ (1)DNAを取り込ませた大腸菌に500 nLのLB培地を加えた。 (2)37℃で15～60分インキュベートして、抗生物質耐性遺伝子が活性化するのを待った。 (3)別の遠沈管に大腸菌を50 nL移し、BL培地を250 nL加えかさあげした。 (4)それぞれの遠沈管に40 nLの100 mM IPTGと40 nLの40/mL X-galを加え、軽く撹拌した。 (5)100 ng/mLのアンピシリンを含むLB寒天培地2枚に、それぞれの遠沈管の大腸菌を撒いた。 (6)滅菌したスプレッダーで水気がなくなるまで満遍なく広げた。 (7)37℃の気相インキュベーターに入れて、一晩放置した。 このような手順で実験を行ったのですが、全くコロニーが出来ませんでした。 なぜでしょうか？ よろしくお願いしますm(__)m
- ベストアンサー
- 生物学
- 病原性大腸菌について
学校で病原性大腸菌について調べないといけなくなりました。しかし病原性大腸菌の細胞侵入性のことについてインターネットで調べていてもいまいちよくわからないので、他の毒素原性や腸管出血性とかとどう違うのか、感染経路や症状、今まで流行した事例など詳しく知りたいのです。知っている方教えてください。お願いいたします。m(_)m
- 締切済み
- 病気
- 目的遺伝子のクローニングについて
大腸菌にプラスミドDNAを入れ、目的遺伝子を複製させる簡単な実験ですが、このとき、大腸菌に入るプラスミドDNAの個数というのは、大量かつ正確にクローニングするための条件として、何か関係性があるのでしょうか？どれくらいの個数を取り込ませた大腸菌が一番よいのでしょうか？ もともと大腸菌にはプラスミドDNAが寄生している状態で存在しているので、複数個のプラスミドDNAが入り込んでも問題はないと考えました。もし大腸菌が1個だけプラスミドDNAを取り入れたとき、何か不都合がない限りは、1個でも複数個でも関係ないと考えました。 ちょっとネットで探してもよくわからなかったんで、ご回答のほうをよろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌JCM1649について詳しく教えてください
大腸菌JCM1649の特性を知りたいのですが。 どの程度で死ぬのか、温度に対する繁殖の経時変化など。 参考となる文献や論文があれば教えてください。
- 締切済み
- 生物学
- 大腸菌の形質転換について
大腸菌のコンピテントセルは対数増殖期の細胞を塩化カルシウム溶液で処理することによって得られる。 という風に説明されていることが多いのですが、なぜ塩化カルシウム溶液で処理するのですか？？ 処理することによって大腸菌にはどのような変化が起こっているのでしょうか？？
- 締切済み
- 生物学
- 大腸菌の複製について
すみません。質問している当人が何が分かっていないのか分からない状態ですので、質問文が大変読みにくいかと思いますが、どうぞ大目に見てやってください。 現在受講している講義の課題で「大腸菌のＤＮＡ複製と、エピゲノムの複製を比較しなさい」というような問題が出ました。 しかし、たまたまその話をしている回で体調不良を起こし、欠席してしまっていたため何の話をしているのかすら全くわかりません。 頂いた資料（ほぼ説明文が無く、難解な図解なのです・・・）を握りしめ、ネットの検索を駆使し理解を試みたのですが「大腸菌のＤＮＡ複製はどうやら輪になっている遺伝子を、起点となる一点からほどいて読み解くたんぱく質が頑張るらしい」と、「エピゲノムというものは分化してから遺伝情報がなにかしら修飾されることらしい」ということくらいしか解りませんでした。 私の専攻は、芸術の製作方面であり、また生物の知識が生物I止まりですので破滅的に知識、また基礎的な部分の手持ちの資料がありません。 エピゲノム？や大腸菌に関して噛み砕いて教えて下さいますと大変助かります。 また、参考に出来るＷＥＢページなどもありましたら、ぜひ教えてください！
- 締切済み
- 生物学
- DNAクローニングのメカニズムを教えてください！
バクテリアを大腸菌にクローニングするメカニズムを教えてください。遺伝子の組み込みはどんな方法原理で行っているのか、また、組み込みのベクターの選定は何に影響するのかなど、まったくの素人です。一言では、いえないとは思いますが・・・。
- ベストアンサー
- 生物学
- クロラムフェニコールの大腸菌への効果について
はじめまして プラスミドの抽出でプラスミド分子数を増やすのに、タンパク質阻害物質であるクロラムフェニコール【抗生物質】を加えるそうですが、大腸菌の増殖の仕方を探す事が出来ず「何処の段階で阻害」しているのかが分かりません。リボゾームに結合しタンパク質を作れなくするのはわかります、ファージでいるなら殻をつくる時だろうかと思いますが（この場合ＤＮＡだけ増えてく…でもファージには入れてません） ので推測 プラスミドと細胞壁は別々に出来最後に中に入る…なんか違いますねぇ…（ううっ）大腸菌の細胞壁はタンパク質だろうか…たどたどしい質問で申し訳ありませんＴＴ
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌の超音波破砕処理について
自分の研究室では大腸菌によるタンパクの大量発現の際の菌体破砕処理をする前に、－80度で一旦凍結させます。そうした方が破砕されやすいからと、説明をうけたのですが、なぜ破砕されやすくなるのでしょうか？？ 凍結させることによって大腸菌の細胞膜がもろくなるということなのでしょうか？？
- ベストアンサー
- 生物学