βアドレナリン受容体とcAMP

質問

βアドレナリン受容体の活性化とcAMP量を調べる実験なのですが、アゴニストであるisoproterenolを様々な濃度で加えたものと、アンタゴニストであるalproterenolを様々な濃度で拮抗的に作用させたものを用意して、450nmで吸光度を測定しました。

アゴニストはcAMP量を上昇させるので、吸光度は濃度があがるにつれて、高くなるのではないかと思っていたのですが、逆に下がっていきました。また、アンタゴニストではアゴニストと逆の結果がでました。

それで、考えてみたのですが、理由がよくわかりません。吸光度はcAMP量をはかっているのではないのでしょうか？

よろしくお願いします。

回答No.3

osarut

こんばんわ。
一般的に，サンプル中の「物質X」の濃度をELISAで測る場合，濃度が高ければ吸光度はあがることが多いです。が，測定系によっては逆もありえます。
（＝濃度が高いほど，吸光度が低くなる）
これは，直接競合法と呼ばれる測定方法ですよ。

「直接競合法」で検索してみてくださいね。

お礼

遅くなりました。ありがとうございます

回答No.2

happy-engawa

測定の原理によりますが、原理的にcAMPの量が増えたら吸光度は下がる測定系は、よくあります。
　吸光度から単純にcAMPの量を測定することは出来ません。既知の濃度のcAMPの吸光度を測定しましたか。吸光度をY軸にして、既知のcAMP濃度をX軸にして、スタンダードカーブを作製してください。そこに、未知のサンプルの吸光度を当てはめて、定量するのが普通です。説明書に書いてあると思います。

お礼

遅くなりました。ありがとうございます

回答No.1

pi3-kinase

cAMP測定の原理をきちんと理解されていますか？ELISA法を用いた、非RI測定法ですよね？どのように、実験を進めたか、プロトコールを再確認すれば分かると思います。

お礼

遅くなりました。ありがとうございます