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比活性について

HPLCを用いて薬物代謝酵素活性測定を行い、ピークの高さ比と面積比からそれぞれ検量線をひき、比活性を求めました。その結果、ピークの高さ比で求めた場合は0.43nmol/min/proteinだったのに対し、面積比で求めた場合は0.86nmol/min/proteinと差がでてしまいました。本来ならどちらで求めた場合でも近い数値が得られないといけないと思うのですがなぜこのような結果がでたのかよくわかりません。考えられる原因として何かありましたら助言をお願い致します。

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
回答No.2

検体の「ピーク面積」÷「ピーク高さ」の値を求め、検量線サンプルのそれと比べてください。 おそらく違っていると思います。 原因として考えられるのは、１）ベースラインの引き方が不適なために、検体のピーク面積が正しく求められていない、又は２）測定したい化合物に夾雑物のピークが混入している。 ピーク形状が悪いときに、このようなことが起こりますので、得られた数字だけでなくクロマトグラムを良く見て判断してください。

yukanch
質問者

お礼

クロマトグラムを見てみると確かにベースラインの引き方がよくないような気がします。もう一度引きなおして計算してみます。有難うございました！

その他の回答 (1)

  • mot-0
  • ベストアンサー率53% (7/13)
回答No.1

「流速」のパロメーターを変えてしまったとか。 まさかと思いますが、ありがちなので。 「圧」のところも注意してみてください。

yukanch
質問者

お礼

助言有難うございます。注意してみてみようと思います！

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