物質とpH

質問

pHの異なる水溶液中（酢酸水、水、NaOH)に、ある物質を同濃度になるよう溶かしHPLCで測定すると、その面積があきらかに違っていたのですが、どうしてそうなるのですか？

回答No.3

noname#160321

「理論的」的な説明でなく「泥臭い」やり方ですが。
３種のサンプル溶液を、同濃度、同体積取り、ｐHを調整し直します。つまり皆んな同じ条件に「戻して」しまうのです。イオン強度も気になるようなら酢酸ナトリウムなどを加えたりして…。
これで再注入してみます。
＃２様の(1)なら新しい条件が「不利」な場合を除き、「分解」を経験したサンプルは小さく出るでしょう。
まだ何か忘れているような気がするのですが、ボケていて、実験の際にあった「何か」が思い出せていない。(汗)

お礼

どうもありがとうございました。
教えていただいた方法で測定してみました。すると、高かったピークは中性で2/3程度低くなりました。中性にする前の状態は、いわいる「分解」を体験中・・・？放っておくとさらにどんどん分解していくのですね。

回答No.2

onigirikun

質問の条件が抽象的すぎて難しいですが・・・・。

移動相とは別に、試料を溶かすための溶液として異なるpHの水溶液を用いた。カラムはODSで、検出は紫外か蛍光を使ったとして話をします。

(1)ある物質がそのpH では安定して存在できなかった。
要するに溶液に溶かしたことで物質が壊れてしまい、検出された量が実際のものよりも減ってしまった。

(2)溶かす溶液量が多すぎたり、移動相とうまく混合されないと、カラムへの吸着脱離が溶かした溶液のpHに影響されることがある。これを防ぐため、インジェクション前に移動相で希釈したりする。当然だけど、移動相と混合して析出するなんてのは問題外です。

(3)検出の際にもpHの影響を受けた。これは、少し考えにくいが、可能性としては捨てきれない。
化合物はpHにより違ったイオン状態をとる。当然これは分離にも影響し、紫外の吸光や蛍光の大きさにも影響する可能性がある。

(4)測定したときの室温が違った。
カラムの温度も分離に影響する。きちんと測定する際にはカラムの温度を一定にする必要がある。カラムヒーター(恒温層)を使うなど。

(1)が一番考えられる気が・・・。

お礼

(1)酢酸水でとかした時のほうが、高いピークでした。
(4)酸性→水→アルカリ性→酸性→水→アルカリ性と繰り返し測定したので・・・。
(2)移動相は7割が水系です。なので、混合されていないとは、考えにくいのです。
(3)でしょうか・・・。

回答No.1

noname#62864

一部が塩になって保持時間が変化し、別の所に出てきた可能性はないでしょうか。

また、pHの影響で吸光係数が変化しているかもしれませんが、それなら保持時間も変化しそうな気がします。

お礼

保持時間はぴったりのところに出てきました。

一部が塩になる、というのはpHが酸性のときに起こることなのですか？