ＲＴ－ＰＣＲ法について

質問

ＲＴ－ＰＣＲ法を勉強していて疑問に思ったのですが、
cDNAを増幅した後、mRNAをつくるとき、作られたmＲＮＡはcDNAとハイブリダイズしていると思うのですが、そのハイブリダイズしているｃDNAはもう鋳型として使われることはないのですか？それとも一本鎖になって、またmRNAを作るための鋳型として使われるのでしょうか？

回答No.3

courreges · ベストアンサー

RT-PCRとは「reverse transcriptionでmRNAからcDNAを作り，このcDNAをテンプレートにしてPCRを行う」方法を指します．2つの反応は別々に行うのです．RT反応でテンプレートとなるmRNAは組織，細胞株などから抽出したものを用います．ですから，通常「mRNAをつくること」はありません．

遺伝子の発現の有無や量をmRNAレベルで調べるときやタンパクをバクテリアなどの系で発現させたいときなどにこの方法を使います．

お礼

やっぱりそうだっだのか、、、。
　インターネットで少し調べたとき、「ＲＴ－ＰＣＲ法によるｍＲＮＡの検出」と書いてあるものがおおかったので、かってにｍＲＮＡを作ることが最終目的だと思い込んでいました、、、。
　とても勉強になりました。どうもありがとうございます。

回答No.2

hebikera

若干誤解があるかもしれませんね。
生物の体内でゲノムDNAから転写されてできるのがmRNA。
このmRNAを逆転写(RT)してできるのがcDNA。
普通、PCRでcDNAを増幅してもmRNAにはなりません。
増幅されたものはcDNAです。
ちなみに2本鎖のcDNAはどちらも鋳型になります。

お礼

勘違いしていることが解決いたしました。
　ｍＲＮＡを作るところも反応に含まれていると思い込んでいましたが、
違うのですね。ＰＣＲ法については、理解できたのですが、ＲＴ－ＰＣＲはどこを調べていいのかわからなくて、、、。
　でも疑問が解決してよかったです。ありがとうございました。

回答No.1

courreges

＞cDNAを増幅した後、mRNAをつくる
というのはどの段階のことですか？

RT-PCR法は

抽出RNA
　↓　RT（逆転写反応）
cDNA
　↓　PCR
PCR product

のような流れですが．

それともこの前，もしくは後にin vitroでmRNAをつくらせるということですか？

補足

＞ｃＤＮＡ
　　　↓　ＰＣＲ
　ＰＣＲ　product
の段階でmRNAが作られると私は解釈していたので、この段階のことをさしているのですが、、、。
＞抽出RNA
　　↓　RT
　ｃＤＮＡ　　の段階でもできるのでしょうか？
まだ、勉強したてなもので、間違った解釈をしているのかもしれません。
もしよろしければ、そこのところも教えてください。