細菌DNAの単離、精製の手順と結果
- 細菌DNAの単離、精製の手順と結果についてまとめました。
- 細菌DNAの単離、精製の実験で得られるDNAやタンパク質は、三層のどの層に含まれるのかを調査しました。
- また、実験手順の中でのゆっくり混合する理由や、分離したDNAの沈殿に影響する液体についても解説しています。
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細菌DNAの単離、精製
細菌DNAの単離、精製の実験について、下記３問について教えてください。 １）以下の手順でDNAならびにタンパク質を得た場合、それぞれ(1)～(3)のどの層に配合されますか。 ２）手順５のゆっくり混合する理由は『切断されやすいDNAの保護』という意味合いでよろしいでしょうか。 ３）分離したDNAのある層に、二倍体のどんな液体を加えるとDNAが白い繊維状の沈殿となりますか。 １．培養した細菌を遠心する ２．菌体が沈殿する ３．エチレンジアミン四酢酸（EDTA)を加える ４．ドデシル硫酸ナトリウム（SDS)を加える ５．フェノールを加え、ゆっくり混合する ６．遠心する ↓ （結果）三層ができ、いずれかに単離したDNAが含まれる (1)上層：透明な液体の層 (2)中層：白柔な個体の層 (3)下層：透明な液体の層 よろしくお願いいたします。
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>DNAはてっきり下層に沈澱するものかと思いっていました。 >DNAはタンパク質より軽いため、上層にくるのですか？それとも液体の色目が見極めの >ポイントですか？ DNAとタンパク質の重量比ではないですね。 最初のEDTAにDNAがとけ込んでいます。 そしてフェノールを入れた後、タンパク質、その他諸々がフェノール層にとけ込みます。 遠心分離すると、DNAの解けている水槽は、フェノール層に比べて比重が軽いため、上層にきます。 ３についてですが、DNAは塩の入っている液体に溶解している場合、アルコールを入れると析出するという性質を持っています。 アルコールは鎖の長いものの方がいいのですが、ブタノールになると極端に水に溶解しにくくなるため、一般的にはプロパノールを使用します。 ちょくちょくに見に来るので、いつでもどうぞ！ 勉強がんばってくださいね。
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- rakudasax
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１）以下の手順でDNAならびにタンパク質を得た場合、それぞれ(1)～(3)のどの層に配合されますか。 DNAは１の上層の透明な液体の層 タンパクは中層。 ２）手順５のゆっくり混合する理由は『切断されやすいDNAの保護』という意味合いでよろしいでしょうか。 良いです。 ３）分離したDNAのある層に、二倍体のどんな液体を加えるとDNAが白い繊維状の沈殿となりますか。 二倍体？ おそらくイソプロパノールの事ですね。
お礼
ありがとうございました、周りに聞ける人が居ないので本当に助かりました。 DNAはてっきり下層に沈澱するものかと思いっていました。 DNAはタンパク質より軽いため、上層にくるのですか？それとも液体の色目が見極めのポイントですか？ ３)の回答については全く存じ上げなかったので、また調べてみます。 また、この類の質問をすると思います、機会があればいろいろ教えてください！
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お礼
度々のご回答、またご親切なお言葉をありがとうございました。 なぁるほど、、 EDTA→DNA フェノール→タンパク質 それぞれの性質によろ、ということですね。 奥の深い話ですので、勉強もなかなか追いつくことが大変です。。。。 勉強、頑張ります＾＾ 回答者様もよい休日をお過ごしください！！