HPLCで移動相にTFAを用いるのは何故？
- HPLCで移動相にTFA（トリフルオロ酢酸）を使用する理由について疑問があります。
- TFAは強酸であるため、HPLCで使用する際には壊れる可能性が気になります。
- また、有機溶媒の中にTFAを入れる理由や他の代替物がない理由も知りたいです。
- ベストアンサー
HPLCで移動相にTFAを用いるのは何故？
題名のとおりですが。 最近畑違いの論文もちらほら見ているのですが、有機物とかではなく錯体をHPLCで分けたとかあってへー！と思い見ております。 ところが、私自身HPLC（ODSとかを固定相に使ったやつ）などまったく使わない研究をしていることもあるので、移動相に何故強酸のトリフルオロ酢酸（TFA）を使うのでしょうか？強酸ですよね？壊れないんですかね？ そもそも、有機溶媒の中にTFAなんぞをなぜ入れるのでしょうか？他のものでは代用が聞かないような機能を持っているのでしょうか。 多少興味本位ではありますが、詳しく教えていただけたらと思います。 （あわよくば、使ってみようかと…♪）
- stone_wash
- お礼率69% (707/1011)
- 化学
- 回答数1
- ありがとう数1
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
こんにちは 強酸だからといって有機物が壊れるとは限りませんよね。 わたしは多糖類の加水分解にTFAを使って、構成糖の組成を調べてました。TFAは刺激の強い酸ですが酸化が起きないので使いやすいです。 他の理由があるとしたら。。。それは著者に聞かないとわからないです。
関連するQ&A
- 酸を含む試料をロータリーエバポレーターで濃縮する際・・・。
発酵食品（醤油および日本酒）中の活性画分を移動相に0.1％TFA（トリフルオロ酢酸）-水および0.1％TFA-アセトニトリルを用いた高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で分取しています。 HPLCで分取した0.1％TFAを含むこの活性画分をロータリーエバポレーターを使って減圧濃縮しているのですが、この際TFAによって試料中の成分が加水分解してしまうのではないかと不安に思っています。 有機溶媒にも使える塩基性型の樹脂にTFAを吸着させて取り除くという方法を以前教えて頂いたのですが、この方法でTFAを取り除こうとすると試料中の酸性の物質も吸着されてしまうのではないかと疑問に思っています。 TFAを取り除くために共沸も利用できるのであればどの様な溶媒が適切かアドバイスを下さい。また、ここに挙げた例以外に良い方法があったら教えて下さい。宜しくお願いします。
- ベストアンサー
- 化学
- 逆相HPLC～移動相の白濁～
逆相HPLCで移動相が白濁してしまいます。追記欄の対策は既にとってありますが、依然白濁が見られブランクランでゴーストピークが現れてしまいます。どうか対処法ご教授くださいませんでしょうか。お願い致します。 【条件】 流速 0.5 ml/min 温度 室温 移動相 A液：水+0.1% TFA B液：アセトニトリル+0.1% TFA RUN PROGRAM 0-10min A 100% 10-40min B 0-50% 40-50min B 100% カラム ODSカラム 波長 220nm,280nm です。 【考えられる原因】 (1)前使用者が微生物破砕粗製生物をアプライしていた。⇒この時のとけ残りがピークとして現れている？ (2)前使用者がカラムをA液（水+0.1%TFA）で保存していた。⇒バクテリアの繁殖か？ (3)前使用者の有機溶媒がメタノールだった。⇒メタノールとアセトニトリルが混和して白濁か？（洗浄は十分したと思いますが…） 【問題点】 廃液が白濁する、ゴーストピークがいつまでも現れる（特にB液 100%のときが激しく） 【既に取った対処法】 (1)100%メタノールでカラム洗浄（一晩） (2)100%アセトニトリル+0.1%TFAでカラム洗浄(一晩) ※HPLCの廃液は白濁しますが、試しに移動層A液とB液を試験管で混和しても白濁は見られませんでした
- 締切済み
- 農学
- ＨＰＬＣの分離対策に使う緩衝液について。
逆相ＨＰＬＣの質問なのですが、金属不純物の為に起こる テーリングや再現性が失ってしまう事から緩衝溶液として アセトニトリル水に燐酸カリウムを混ぜた溶媒を使って 分離を試みたいと思っています。 しかし、分離後の各画分に含まれている塩の除去法がよく わからなくて困っています。 ＴＦＡならば揮発性が高いので濃縮乾固すれば問題ないと 思いますが、燐酸や硫酸等はどう後処理を行なえば良いのか わかりません。初歩的な質問ですみません。 カラムはＯＤＳを使っています。
- ベストアンサー
- 化学
- HPLCの逆相カラム東ソー製ODS-120Aについて
HPLCの実験を現在おこなっております。 カラムの溶媒置換時に異物が混入している溶媒を 流してしまいました。カラムを詰まらせたみたいです。 使用カラムは東ソー製の逆相用カラムODS-120Aです。 【原因】 有機溶媒(96％メタノ－ル、4％クロロホルム)をセルロースメンブレンにて 濾過してしまい溶媒にセルロースが溶解してしまいました。その後、その ことに気が付かずHPLCにその溶媒をかけてしまい、カラムを詰まらせて しまいました。 【症状】 ポンプの圧力が安定せず、なおかつカラムの最大圧力である15MPaを 越す勢いで上昇します。なお、ダミーカラムを換装時には圧力は一定値を 保つのでHPLCの機器には問題は無いと思われます。 【施したカラム回復処置】 取扱説明書に記述してあったように不純物が混入した場合に出口のエンド フィッティングより送液をおこない、入り口付近のエンドフィティング付近 の異物を押し出す処置をおこないました。改善はみられませんでした。 他にカラムに詰まった異物を除去する方法がございましたら アドバイスをよろしくお願いいたします。
- ベストアンサー
- 化学
- ビタミンCの標準試料
現在HPLCを用いて野菜のビタミンCを測定行っています。 野菜の中のアスコルビン酸は酸化され易く、メタリン酸の中で抽出を行っているのですが、 標準試料に用いる粉末のアスコルビン酸も酸化されやすい状態なのでしょうか？ もし、そうならば標準試料に用いる粉末のアスコルビン酸を溶かす溶媒はメタリン酸にするのが適当なのでしょうか？ お暇なときにでよろしいのでお願いします。 また、経験者の方で何かアドバイスがありましたら、お願いします。 HPLCのカラムはODS、移動層はTFAを用いています。
- ベストアンサー
- 化学
- データの捏造について
データの捏造はどのようにしたらなくなるのでしょうか。 私は、有機化学（有機合成）の研究室に所属している学生（院生）ですが同級生がどうやら意図的かどうかわかりませんが、データを捏造しているようです。私たちの研究している分野は対称性のある分子の内、一方の分子を選択的に合成することを目的とした研究をやっています。 その学生は全くといっていいほど自分が合成した化合物のNMRを測定しておらず、HPLCを使用して、不斉収率を決定しているのみです。HPLCの検出器はUV機能しかついていません。 つまり、その学生は自分が合成した化合物を単離したのち、重さを量ることりより収率を求め、HPLCにより不斉収率を決定しているだけなのです。HPLCには溶媒（ヘキサンや酢酸エチル）は検出されないため、本当にその学生が出した収率は正しいのかが疑問が残ります。 実際、その学生が出した収率にはquant.が多く見られます。 なお、その学生は学会誌にも論文を出していますが、論文中に記載する機器データは、HPLCのデータ以外、別途合成によって合成してきたたものや買ってきた試薬でMS、IR、NMRのデータを集めているようです。 これっておかしくないですか？ この学生は博士課程を志望しているので、なんだかいろんな意味で残念でたまりません。 皆さんはどう思いますか？
- ベストアンサー
- 大学院
- 水溶性化合物の除タンパク方法について
かなり水溶性の高い化合物を合成し、マウスに投与後のplasmaサンプル中の化合物濃度をHPLCで測定したいのですが、いい除タンパク方法が見つかりません。 有機溶媒に全く溶けない化合物なので、酸での除タンパクを試してみたのですがなかなかうまくいきません。 できればODSのC18カラムで測定したいのですが、詳しい方いましたらアドバイスをお願いします。
- 締切済み
- 化学
- HPLCの再現性について
現在、フェノール化合物を基質とした微生物変換について研究をしております。 HPLCにて代謝生成物の定性、定量を行っているのですが、同じサンプルを測定しているのにピークの数が同じにならなかったり、またピークの面積もその都度変わってしまいます。そして、検量線をひく際の濃度の範囲というものは例えば還元糖の検量線をひくときのようにある程度決まっているものなのでしょうか？50 %エタノールにて流路の洗浄を行い若干の改善は見られたものの、完全ではありません。 測定条件といたしましては、カラムがGLサイエンス社製のInertsil ODS-3、酢酸バッファーとアセトニトリルのグラジェントにて流速1 ml/min、カラム温度は50℃一定、ランタイムは50 minです。インジェクション方法はオートサンプラーを用いております。 ご教授の程、よろしくお願い致します。
- 締切済み
- 化学
- 抽出における水層の分析をしたいのですが・・・
親水性(ある程度は疎水的)で環状構造をもった物質を、何らかの溶媒を使って抽出し、それを有機層ではなく、水層を評価していきたいのですが、何か良い方法をご存知の方はいらっしゃらないでしょうか？ 今までは有機層を回収し、減圧乾燥させて分析にまわすという感じだったのですが、今回は水層を回収して分析したいのです。回収した水層を濃縮させる方法や、適切な抽出溶媒を探しています。 有機層の分析方法としては、回収した有機層をエバポレーターで減圧乾燥して、逆相HPLC分析や、in vitroでの抗酸化活性評価、また、逆相HPLCによる分画などを行っています。 また、もう1つ質問したいのですが、もしも今までと同様に酢酸エチルで抽出し、回収した水層を分析するのであれば、この回収した水層中に含まれる糖やタンパク質は除外しておきたいのですが、なにか良い方法はご存知ないですか？ 文献を検索しても(探し方が下手なんでしょうか・・・)なかなか探しきれません。少しでも情報が欲しいです。よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
お礼
遅れてすみません。 確かに強酸といっても壊れるとは限りませんね… 加水分解ですか。ごちごちの有機をやっていないのでなかなかイメージがわきませんが、確かにTFAはその点有利ですよね。 著書にしか…間違いありませんね！ 一回聞いてみたい気もしますがｗ 回答ありがとうございます。