- ベストアンサー
クロラムフェニコールの大腸菌への効果について
はじめまして プラスミドの抽出でプラスミド分子数を増やすのに、タンパク質阻害物質であるクロラムフェニコール【抗生物質】を加えるそうですが、大腸菌の増殖の仕方を探す事が出来ず「何処の段階で阻害」しているのかが分かりません。リボゾームに結合しタンパク質を作れなくするのはわかります、ファージでいるなら殻をつくる時だろうかと思いますが（この場合ＤＮＡだけ増えてく…でもファージには入れてません） ので推測 プラスミドと細胞壁は別々に出来最後に中に入る…なんか違いますねぇ…（ううっ）大腸菌の細胞壁はタンパク質だろうか…たどたどしい質問で申し訳ありませんＴＴ
- 生物学
- 回答数4
- ありがとう数2
- みんなの回答 （4）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
すみません、通りすがりなので詳しくは判らないのですが。 大抵の場合、増殖させたいプラスミドに抗生物質耐性遺伝子が組み込まれています。そして、そのプラスミドにあわせた抗生物質を培養液に入れて培養します。 するとプラスミドを持った大腸菌は抗生物質耐性遺伝子から作り出される物質のために抗生物質が効きにくくなり増殖することができ、 プラスミドを持たない大腸菌は抗生物質の作用で死滅し、 最終的にはプラスミドを持った大腸菌のみが選択的に普通に増殖していくということでプラスミドを増やしていく原理だったはずです。 つまり、大腸菌1匹（？）の中でプラスミドがどんどん増えるのが主な増殖方法ではなく（そういうこともあるかもしれませんが私は知りません）、大腸菌群全体でプラスミドを持ったもののみを増やしてプラスミドを抽出する増殖法であるということで理解しています。 ファージについての知識が私は乏しいのですが、ファージはプラスミドを大腸菌に導入するときに利用することはあっても、増殖するときには関係なかったような気がします。
その他の回答 (3)
- cooh
- ベストアンサー率50% (7/14)
普通に培養した後、クロラムフェニコールを加えてさらに培養を続けると、 菌は分裂できず、菌体内でプラスミドだけが複製するので、 大腸菌の細胞あたりのプラスミド数が増え、回収率が上がります。 コピー数が少ない株を使うときはこの方法が良いようです。 どういうしくみで分裂が阻害されるのかまでは知りませんが…。
- Kohntarkosz
- ベストアンサー率37% (32/85)
プラスミドのコピー数を制御する宿主因子タンパク質の作用を抑えるためだと記憶してます。 うろ覚えなので自信がないです。
- kaitaradou
- ベストアンサー率8% (102/1147)
クロラムフェニコールに耐性を与える遺伝子をプラスミドが持っている場合環境にクロラムフェニコールが増えてくるとプラスミドの数が増えるような反応がおきるのではないでしょうか。プラスミドが増えれば耐性遺伝子も増えて大腸菌の耐性も増すと考えられます。ほかにクロラムフェニコールが大腸菌の調子を狂わせてプラスミドの増殖を抑えられなくなるということも考えられるのではないでしょうか．
関連するQ&A
- 大腸菌のテトラサイクリン耐性
テトラサイクリン耐性を持っている大腸菌、というのは一体どのような機構をしているのでしょうか。 テトラサイクリンは７０Sリボソームでのタンパク質合成を阻害する作用があるのですよね？ 大腸菌はばっちり作用の対象に入っていると思うのですが……。
- ベストアンサー
- 生物学
- ベクターとしてのコスミドについて
はじめまして 先日の授業で「コスミド」というλバクテリオファージのＤＮＡの性質とプラスミドの機能を合わせもった「ＤＮＡベクター」と習いました。大容量情報を組み込んだプラスミドは大腸菌へ込みめる確率がへるので、ファージの形で入って体内でプラスミドとして作用させるものだともいってました。 形を見るとＣＯＳ部位と薬剤耐性の部位と複製開始地点のoriをもつものだそうで…ですが、このＣＯＳ部位は必要ないのではと（何故いるのかがわかりません） λファージではこのＣＯＳ部位は大腸菌の体内で増えたファージの体のパーツを頭部に戻すために認識されるところだそうで、でもコスミドは大腸菌へ感染する最初はファージで感染後の大腸菌体内での増殖では、タンパク質（体）をつくる情報がないので体は出来ず、プラスミドとして働くとありました。とすると、やはり認識する必要がないので、ＣＯＳ部位はいりませんよね？＾＾； でも、このＣＯＳ部位は片方の12塩基が長く飛び出た形をしていて、ＤＮＡにより？１本の形のλファージのＤＮＡが（ファージはＲＮＡだたったかな）両端がくっついてリングの様な円形になる事ができるそうです。 で推測なのすが、この「コスミド」の場合はファージのＤＮＡを頭部のパーツに入れる意味ではいってるのではなく（体が出来ないので不必要）本来の目的である、プラスミドにする為に（環状）に戻すためにつかわれる部位・で良いのでしょうか？ １、ファージの方が組み込みやすい（情報は１本鎖） ２、プラスミドは多いと入れない（情報は環状） コスミド ファージ（１本鎖・誤魔化す）入る→体内でプラスミド（環状・本性現す） 簡単に書くとこうなりますが…教科書には全然書いてませんのでＴＴどうかお助けを…遺伝子の勉強って面白いけど難しいＴＴ
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌を利用したタンパク合成
大腸菌を利用してEGFPのタンパクを合成したとき、EGFPのcDNAを組み込んだプラスミドを使うと成功するけど、クラゲの染色体DNAから切り取ったEGFP遺伝子をプラスミドに組み込んだ場合必ず失敗してしまうのはなぜでしょうか？
- ベストアンサー
- 生物学
- バクテリオファージと大腸菌の実験（ハーシーとチェイス）
高校生物からの質問です。 バクテリオファージを大腸菌に寄生させ、ＤＮＡの働きを調べる実験（ハーシーとチェイスの実験）で、ファージのタンパク質外殻の標識に放射性同位体のＳ、ＤＮＡの標識に放射性同位体のＰを使うとのことですが、なぜ放射性同位体でわざわざ標識をつける必要があるのでしょうか？そもそもタンパク質にはＳがあってＰがなく、ＤＮＡにはＰがあってＳがないのですから、標識をつけるまでもなく、大腸菌内部に侵入した物質のＳとＰの有無から、それが何か特定できると思うのですが。 宜しくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌の培養と抗生物質
タンパク質合成プラスミドを組み込んだ大腸菌を培養しています。 プレカルチャー開始３０分後に抗生物質を添加しました。 抗生物質添加後に耐性菌のセレクトが行われると解釈して いいのでしょうか？
- ベストアンサー
- 生物学
- 定常期の大腸菌を使うのはなぜ？
コンピテントセルを用いてプラスミドＤＮＡを増やすとき、 死滅期に入ってから回収するのではダメなのでしょうか？ 大腸菌をＭＡＸまで増やして、その大腸菌が死んでから回収するとき、どんな不都合があるのかが、よくわかりません。 これまで、単に「無駄に長時間培養しても効率が悪いから」だと思っていたのですが、どうやら大腸菌が死滅期に入ると不都合があるようだということを聞き、どうしてだろうかと考えています。 死んだ大腸菌が破裂してゲノムＤＮＡが混入してしまうから、というようなことなんでしょうか？？
- ベストアンサー
- 生物学
- ファージを感染させて大腸菌の中で１本鎖ＤＮＡを作りたい。
ファージを感染させて大腸菌の中で１本鎖ＤＮＡを作りたいのですが。宿主大腸菌を選択する時に遺伝子型として何に注意が必要でしょうか？
- 締切済み
- 生物学
- 大腸菌 アンピシリン耐性遺伝子
先日実験で、大腸菌にCaイオンを用いてDNAプラスミド(GFP遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子)を組み込む形質転換の実験を行ったのですが、大腸菌をアンピシリン付加の選択培地に塗布する前にアンピシリン耐性遺伝子が発現する時間を設けましたが、この発現する時間は必ずしも必要がないようと言われました。なぜ、発現する時間を待たなくてもいいのですか？？ 自分の考えでは、アンピシリンは細菌細胞壁のペプチドグリカンの架橋構造を阻害することが関係していると考えています。 詳しく分かる方がいれば、なぜ発現時間を設けなくてもいいのか教えてください。
- 締切済み
- 生物学
- 大腸菌の遺伝子操作について・・・
大腸菌にプラスミドを加え形質転換させました。 最終的にLB/ampプレートに溶液をまき一日待ちました。 amp→アンピシリン（抗生物質） 大腸菌は紫外線に当てて発見できましたがこの大腸菌は最初の大腸菌と同じのができあがったと考えていいもですか？それとも違う物質なのですか？
- ベストアンサー
- 生物学
- クロラムフェニコールの菌の生育阻害方法について。
はじめまして。クロラムフェニコールの菌の生育阻害方法について、調べていたところ、どっちが正しいのかわからなくなってしまったので、もしよろしければお答えを頂戴したいと思います。 CPの抗菌方法は、 (1)：細菌のリボソーム50S分画に結合して、tRNA・アミノ酸のアミノ残基とポリペプチドとの結合を阻害 なのか、 (2)：ペプチジルトランスフェラーゼを阻害することでタンパクのペプチド結合の生成を阻害 なのか、どちらなのでしょう？よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 化学
