emujeiのプロフィール

@emujei emujei
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お礼をしようと思ったら、もう書き込めないようなのでここでいわせていただきます。プラスミドのコンストラクションですが、ゲル精製を行わずにトランスフォーメーションしたら、コロニーが500程生えましたが、そのうち30個つっついたら二個目的の物が拾えました。長波長で手短に行っていたがUV照射、もしくは新しく買い換えたがゲル精製キットがうまくいかなかった原因であると考えられます。皆様が色々教えてくださったおかげで半年の失敗の後、ようやくうまくいきました。本当にありがとうございました。

  • 登録日2010/07/18
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  • TAクローニング後のシークエンスに関して教えてください。

    TAクローニング後のシークエンスに関して教えてください。 生命工学の分野で実験している大学生です。 現在、遺伝子のクローニングを行っています。 ある生物由来のRNAからcDNAを合成し、cDNAをテンプレートとして約1000bpの目的遺伝子をPCRにて増幅、増幅断片をTAクローニングでTAベクターに入れました。 インサートの確認をするため、ベクタープライマーでシークエンスをしましたが、その配列の解読に困っています・・ フォワードのプライマーで読んだ配列は、目的遺伝子配列の相補鎖となっていました。これで、3'側が900bpほど確認できました。しかし、リバースのプライマーで読んだ配列がどうなっているのかよくわかりません・・。 TAクローニングではインサートが逆向きになることがあるとのことですが、これはそのケースでしょうか?その場合、リバースプライマーで読んだ配列はどのような配列になるのでしょうか? 初投稿で読みにくい、説明不足な点もあるかと思いますが回答よろしくお願いします。